一、血小板免疫学检测技术进展
　　第一代检测方法
　　血小板凝集试验
　　血小板凝集抑制试验
　　血块收缩抑制试验
　　血小板移动抑制试验
　　补体固定试验
　　血小板因子3释放试验
　　铬⁵¹释放试验
　　C¹⁴-复合胺释放试验
　　第二代检测方法
　　检测血小板表面相关的免疫球蛋白
　　血小板悬浮液免疫荧光试验
　　流式细胞术
　　放射免疫检测（I¹²⁵葡萄球菌蛋白A，I¹²⁵抗人免疫球蛋白，多抗或单抗）
　　抗球蛋白消耗（第二代检测）
　　补体依赖的羊红细胞溶解抑制试验
　　总PAIG检测
　　悬液计测量
　　电子免疫分析
　　放射免疫扩散分析
　　第三代检测方法
　　血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术（MAIPA）
　　抗原捕获ELISA(ACE)
　　改良抗原捕获ELISA(MACE)
　　免疫微球检测
　　免疫印迹检测
　　芯片技术

　　二、一些主要血小板免疫学检测技术的原理简介
　　1、血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术（Monoclonal Antibody-specific Immobilizationof Platelet Antigen,MAIPA）
　　MAIPA是血小板抗体检测使用最广泛的方法，这个试验需要鼠抗人的单克隆抗体来识别感兴趣的靶抗原，且不与被测的人抗体竞争结合。临床上有重要意义的血小板反应性抗体特异性取决于血小板GPIIb/IIIa,Ib/IX,Ia/IIa,IV(CD36)和HLA-I类分子等。
　　MAIPA方法中血小板谱细胞既与病人血清又与识别血小板膜糖蛋白的单克隆抗体反应。孵育后，洗涤并用非离子清洁剂裂解血小板。离心去除残留碎片后，将裂解液加入先前包被好羊抗鼠IgG的微孔板。单克隆抗体与其结合的血小板膜糖蛋白及人血小板抗体（三聚体）被捕获。经过洗涤步骤后，加入酶标的羊抗人免疫球蛋白检测之前捕获的人抗体。

　　MAIPA法检测HPA抗体原理图。洗涤过的完整的血小板与人血清孵育(以HPA-1a抗体为例)，单克隆抗体与与相应糖蛋白结合（以GPIIb/IIIa为例）。裂解血小板，将上清加入先前包被抗鼠的IgG，用过氧化物酶标记的抗人IgG检测结合在糖蛋白上的人抗体，用合适的显色剂显色。
　　

　　2、ELISA改良的抗原捕获试验(ELISA Modified Antigen Capture，MACE)
　　MACE与MAIPA主要区别于血小板与血清反应后就洗涤，裂解。含抗体及血小板膜糖蛋白的免疫复合物被先前固定特异的血小板膜糖蛋白单克隆抗体捕获。经洗涤后，用适当的酶标二抗检测结合的人抗体

　　MACE方法原理图。血小板先与血清反应，用清洁剂裂解；结合相应抗体的血小板膜糖蛋白（如GPIIb/IIIa）被固定在微孔中的特异性单克隆抗体结合；用适当的酶标二抗检测结合的人抗体。

　　3、流式细胞术(Flowcytometry)
　　流式细胞术检测血小板抗体是利用荧光标记的抗人免疫球蛋白检测病人血清中结合到整个血小板的反应性抗体。检测中，洗涤的血小板与病人血清或质控血清孵育，反复洗涤血小板上非特异结合的免疫球蛋白，用荧光标记的单克隆或多克隆的抗人的抗体（一般用FITC标记的）与之反应，从而检测是否含血小板抗体。血小板在流式细胞仪上分析，检测结果可以用对照的平均荧光值或峰值的比率来表示。
　　因为使用的血小板是完整的细胞，流式细胞术检测出的抗体可以是所针对的血小板及HLA或ABO抗原的抗体。这种方法多用于检测血小板输注效果，血小板交叉配型等。
　　4、混合被动红细胞凝集试验(Mixed Passive Hemagglutination Assay，MPHA)
　　混合被动红细胞凝集试验(MPHA)属于第二代血小板免疫学检测方法。完整的血小板细胞被固定在圆底的微孔板上，然后与血清反应，结合抗体。洗涤后，加入先前预备的致敏抗人免疫球蛋白的指示红细胞。孵育数小时至过夜，将微板低速离心，就可以判读结果。如果有抗体与固定的血小板结合，指示红细胞不因为离心力在微孔的底部形成红细胞扣，而是均匀附着在包被血小板的微孔壁上。阴性反应中，微孔底部中心形成红细胞扣。
　　因使用的血小板是完整的细胞，检测出的抗体可以是所针对的血小板及HLA或ABO抗原的抗体。这种方法多用于检测血小板输注效果，血小板交叉配型等。

　　本栏目负责人：钟周琳